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鸡败血支原体抗体酶联免疫分析试剂盒使用介绍

上海研启生物科技有限公司 发布时间:2020/6/9 19:34:57
鸡败血支原体抗体酶联免疫分析试剂盒使用介绍

本试剂盒仅供研究使用。

96T

使用目的:

本试剂盒用于测定鸡血清,血浆及相关液体样本中败血支原体抗体表达。

实验原理

本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中鸡败血支原体抗体表达。用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原可与样品中败血支原体抗体相结合经洗涤除去未结合的抗原和其他成分后HRP 记的抗原结合形成抗原-抗体-抗原复合物经过彻底洗涤后加底TMB显色。TMBHRP酶的催化下转化成蓝色并在酸的作用下转化成最终的黄色用酶标仪450nm 波长下测定吸光度(OD ,与 CUTOFF值相比较,从而判定标本中鸡败血支原体抗体的存在与否。

试剂盒组成

1

30倍浓缩洗涤液

20ml×1

7

终止液

6ml×1

2

酶标试剂

6ml×1

8

阳性对照

0.5ml×1

3

酶标包被板

12孔×8

9

阴性对照

0.5ml×1

4

样品稀释液

6ml×1

10

说明书

5

显色A 

6ml×1

11

封板膜

6

显色B

6ml×1/

12

密封袋

1

标本要求

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测NaN3的样品,NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

1. 编号将样品对应微孔按序编号每板应设阴性对2阳性对2空白对1

孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)

2. 加样:分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50µl。然后在待测样品孔先

加样 40µl再加 10µl将样,尽不触及孔壁,轻轻晃动混匀,

3. 温育:用封板膜封板后37℃温30分钟。

4. 配液:30倍浓缩洗涤液用蒸馏30倍稀释后备用

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此

5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试50µl,空白孔除外。

7. 温育:操作3


8. 洗涤:操作5

9. 显色:每孔先加入显色A50µl,再加入显色B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

10分钟.

10. 终止:每孔加终止50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色

11. 测定调零450nm波长依OD  加终止液15分钟以内进行。

计算和结果判定:

试验有效性:阳性对照孔平均值≥1.00; 阴性对照平均值≤0.10

临界值(CUT OFF)计算:临界值=阴性对照孔平均值+0.15

阴性判定:样OD < 临界值(CUT OFF)者为败血支原体抗体阴性

阳性判定:样OD 临界值(CUT OFF)者为败血支原体抗体阳性

注意事项

1.操作严格按照说明书进行,本试剂不同批号组分不得混用。

2.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未

用完,板条应装入密封袋中保存。

3.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

4封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

5.底物请避光保存。

6.试验结果判定必须以酶标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长630nm

7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸,使用时必须

注意安全。

保存条件及有效期

1.试剂盒保存2-8℃。

2.有效期:6个月

阅读人数:132 原创作者:上海研启生物科技有限公司

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