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鸡雌激素(E)酶联免疫分析试剂盒使用

上海研启生物科技有限公司 发布时间:2020/6/10 20:12:24
鸡雌激素(E)酶联免疫分析试剂盒使用

本试剂盒仅供研究使用。

检测范围: 96T

2.0 ng/L -60 ng/L

使用目的:

本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本中雌激素(E)含量。

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡雌激素(E)水平。用纯化的鸡雌激素(E

抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入雌激素(E,再HRP标记的E-抗原-酶标抗复合涤后TMB TMBHRP酶的催化酸的色的浅和E呈正 450nm 波长OD 过标准曲线计算样品中鸡雌激素(E)浓度。

试剂盒组成

1

30倍浓缩洗涤液

20ml×1

7

终止液

6ml×1

2

酶标试剂

6ml×1

8

标准品(120 ng/L

0.5ml×1

3

酶标包被板

12孔×8

9

标准品稀释液

1.5ml×1

4

样品稀释液

6ml×1

10

说明书

5

显色A 

6ml×1

11

封板膜

6

显色B

6ml×1/

12

密封袋

1

标本要求

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能

马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测NaN3的样品,NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

1. 标准品的稀释本试剂盒提供原倍标准品一支用户可按照下列图表在小试管中进行稀

释。

60 ng/L

5号标准品

150µl的原倍标准品加150µl标准品稀释液

30 ng/L

4号标准品

150µl5号标准品加150µl标准品稀释液

15 ng/L

号标准品

150µl4号标准品加150µl标准品稀释液

7.5 ng/L

2号标准品

150µl3号标准品加150µl标准品稀释液

3.75 ng/L

1号标准品

150µl2号标准品加150µl标准品稀释液

2. 加样分别设空白(空白对照孔不加样品及酶标试剂其余各步操作相同标准孔、

待测样品孔在酶标包被板上标准品准确加50µl待测样品孔中先加样品稀释40µl


然后10µl样品5加样量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3. 温育:用封板膜封板后37℃温30分钟。

4. 配液:30倍浓缩洗涤液用蒸馏30倍稀释后备用

5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此

5次,拍干。

6. 加酶:每孔加入酶标试50µl,空白孔除外。

7. 温育:操作3

8. 洗涤:操作5

9. 显色:每孔先加入显色A50µl,再加入显色B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

10分钟.

10. 终止:每孔加终止50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色

11. 测定以空白空调零450nm波长依序测量各孔的吸光OD  测定应在加终止液15分钟以内进行。

操作程序总结:

以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样

OD 值由标准曲线查出相应的浓度再乘以稀释倍数或用标准物的浓度OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式将样品OD值代入方程式计算出样品浓度再乘以稀释倍数,


即为样品的实际浓度。

注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未

用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间

控制5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4请每次测定的同时做标准曲线做复孔如标本中待测物质含量过(样OD 值大于标准品孔孔OD 请先用样品稀释液稀释一定倍n后再测定

算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5

5封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

保存条件及有效期

1.试剂盒保存2-8℃。

2.有效期:6个月

阅读人数:172 原创作者:上海研启生物科技有限公司

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