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常见ELISA试剂盒试验条件的挑选

上海研启生物科技有限公司 发布日期:2020/5/6 20:21:35
 elisa试剂盒中,进行各项试验条件的挑选是很重要的,其间包含:
(1) 固相载体的挑选:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其方式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。现在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在运用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一试验条件下进行反响,调查其显色反响是否均一性,据此判明其吸附功能是否良好。
(2) 包被抗体(或抗原)的挑选:将抗体(或抗原)吸附在固相载体外表时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时刻及其蛋白量也有必定影响,一般多采用4℃ 18~24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,调查阳性标本的OD值。挑选OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。对于大都蛋白质来说一般为1~10μg/ml。
(3) 酶符号抗体作业浓度的挑选:首先用直接ELISA试剂盒法进行初步效价的滴定(见酶符号抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参阅品及酶符号抗体分别为不同的稀释度)在正式试验系统里准确地滴定其作业浓度。
(4) 酶的底物及供氢体的挑选:对供氢体的挑选要求是价廉、安全、有明显地显色反响,而自身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌效果,应留意防护。有条件者应运用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是现在较为满意的供氢体。底物效果一段时刻后,应加入强酸或强碱以停止反响。一般底物效果时刻,以10-30分钟为宜。底物运用液有必要新鲜配制,尤其是H2O2在临用前加入。

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